菌株簡介
BL21-AI是一種大腸桿菌表達菌株,來源于BL21菌株,是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r)。在araBAD操縱子的araB位點含有T7 RNA聚合酶基因,T7 RNA聚合酶基因的表達可以通過L-阿拉伯糖或者葡萄糖來調(diào)節(jié),但菌株不含有l(wèi)on蛋白酶。BL21-AI菌株的最大蛋白表達量往往低于BL21(DE3)。BL21-AI是膜外蛋白酶ompT的缺陷型菌株,該酶的缺失能夠有效防止表達的異源目的蛋白在細菌體內(nèi)的降解。 Brian Caliendo (Voigt 實驗室)報道過pCP20質(zhì)粒比較難于轉(zhuǎn)化到這個感受態(tài)細胞中,而pCP20轉(zhuǎn)化到其他菌株中都很正常,但是菌體原因未知。 使用L-阿拉伯糖誘導(dǎo)araBAD啟動子下游的蛋白表達。使用葡萄糖可以抑制araBAD啟動子下游的蛋白表達。注意:即使不加葡萄糖,BL21-AI細胞的araBAD啟動子下游的本底蛋白表達水平仍然很低,加入葡萄糖后能夠進一步的降低本底蛋白的表達水平。 BL21-AI感受態(tài)細胞適用于任何以T7啟動子為基礎(chǔ)的表達載體,能夠進行高水平的重組蛋白表達。 因為菌株體內(nèi)的T7 RNA聚合酶水平能夠進行有效調(diào)節(jié),BL21-AI感受態(tài)細胞能夠有效表達對其他BL21細胞有毒或生長抑制的蛋白。從BL21-AI菌株中獲得目的重組蛋白產(chǎn)量,和其他BL21菌株產(chǎn)量相當(dāng)。 建議選擇該菌株進行蛋白表達的條件如下: 1、你在使用T7啟動子載體(高拷貝或者低拷貝都可以)進行蛋白表達。 2、使用其他BL21進行蛋白表達時,你觀察到明顯的細菌生長的抑制作用。3、你在表達一個已知的毒性蛋白。