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人肝癌細胞（低轉）-熒光素梅標記

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

90%DMEM高糖+10%胎牛血清+1%雙抗

MHCC97-H、MHCC97-L和MHCC97-LM3都是肝癌細胞衍生的細胞株。為HBV陽性。 形態上皮細胞樣，貼壁 培養基 DMEM高糖, 90%; FBS, 10% 復旦大學中山醫院肝癌研究所在研究MHCC97時發現其是異質性很強的細胞群。部分細胞有很強的致瘤性和轉移力，而部分則較弱。因此分離建立了高低轉移性不同的肝癌細胞株MHCC97-H和MHCC97-L。據報道MHCC97-H存在較高的干細胞樣的側群細胞（sp）。肝癌SP細胞具有極高的致瘤性，并可能和肝癌轉移潛能相關。再用人肝癌細胞株MHCC97-H接種裸鼠，進行3次肺轉移篩選，取肺轉移瘤建成皮下接種后高度自發性肺轉移的肝癌細胞系MHCC97-LM3。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。