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永生化小鼠肝星狀細胞

肝臟

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

永生化小鼠肝星狀細胞完全培養基

雖然原代小鼠肝星狀細胞更能真實地反映肝星狀細胞在小鼠體內的生理狀態，但是一方面原代分離培養肝星狀細胞周期長和對技術人員和實驗設備要求較高，另一方面此原代細胞在體外的生長增殖能力非常有限，以至于此細胞不能傳代，這些不利因素制約了原代小鼠肝星狀細胞在實驗室的廣泛應用。欣潤生物的研究團隊擁有多年原代細胞分離培養及細胞永生化服務研究經驗，成功建立了永生化小鼠肝星狀細胞。 肝星狀細胞具有靜止期和活化期兩種狀態。正常情況下肝星狀細胞處于靜止狀態，當肝臟受到炎癥或機械刺激等損傷時，肝星狀細胞被激活，其表型由靜止型轉變為激活型。肝星狀細胞是細胞外基質的主要來源，靜止期肝星狀細胞激活并轉化為肌成纖維細胞樣細胞，各種致纖維化因素均把肝星狀細胞作為最終靶細胞。肝星狀細胞參與了肝臟的纖維化、炎癥產生和免疫紊亂等大多數病理生理過程。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。